Marquage des types de méthyle et d’acides aminés

Les groupes méthyle au carbone 13 protoné dans les protéines deutérées sont d’excellentes sondes pour la structure et la dynamique, et sont cruciaux lors de l’étude de protéines et de complexes protéiques de poids moléculaire élevé. Le marquage méthylique fait référence à des méthodes qui introduisent groupes ¹³CH₃ ou ¹³CHD₂ dans une protéine deutérée uniforme. Le marquage méthylique peut être réalisé dans les systèmes d’expression procaryotes et eucaryotes en ajoutant le ou les acides aminés en quantité suffisante directement dans le milieu de culture cellulaire avant l’induction de protéines. Pour les cultures d’E. coli, la protonation sélective sur les groupes méthyle de l’isoleucine, de la leucine et de la valine (ILV) peut être obtenue en ajoutant des précurseurs de l’acide α-céto au milieu de culture cellulaire à base de D₂O 1 heure avant l’induction. α-cétoisobutyrate est converti en isoleucine et l’acide α-cétoïsovalérique est converti en leucine et en valine. Cette méthodologie a considérablement augmenté la gamme de poids moléculaire utile des protéines et des complexes protéiques pouvant être évalués par RMN lors de l’utilisation des techniques méthyl TROSY.

Application Notes
➤ Stereospecific Leu/Val Methyl Labeling: An Important Technology for NMR Studies of High-Molecular-Weight Complexes
➤ Production of U-[²H], Thy-γ2[¹³CH₃] Labeled Proteins for methyl-TROSY NMR
➤ Isotope Labeling of Alanine Methyl Groups on a Deuterated Background for NMR Studies of High-Molecular-Weight Proteins
➤ Specific Isotopic Labeling of Methyl Groups Has Extended the Molecular Weight Limits for NMR Studies of Protein Structure and Dynamics 

Researcher Perspective
➤ Selective Isotope-Labeling Methods for Protein Structural Studies

Stable Isotopes for Biomolecular NMR

ɑ-Keto Acids view all

Amino Acids view all

Kano, H.; Toyama, Y.; Imai, S.; et al. 2019. Structural mechanism underlying G protein family-specific regulation of G protein-gated inwardly rectifying potassium channel. Nat Commun, 10(1), 2008. PMID: 31043612
Kurauskas, V.; Schanda, P.; Sounier, R. 2017. Methyl-specific isotope labeling strategies for NMR studies of membrane proteins. Methods Mol Biol, 1635, 109-123. PMID: 28755366