Etiquetado de tipo metilo y aminoácidos

Los grupos metilo carbono-13 protonados en proteínas deuteradas son excelentes sondas para la estructura y la dinámica, y son cruciales cuando se estudian complejos proteicos y proteicos de alto peso molecular. El etiquetado con metilo se refiere a métodos que introducen grupos ¹³CH₃ o ¹³CHD₂ en una proteína deuterada uniforme. El marcado de metilo se puede lograr tanto en sistemas de expresión procariotas como eucariotas agregando los aminoácidos en cantidades suficientes directamente al medio de cultivo celular antes de la inducción de proteínas. Para los cultivos de E. coli, se puede lograr la protonación selectiva en grupos metilo de isoleucina, leucina y valina (ILV) agregando precursores de α-cetoácido al medio de cultivo celular basado en D₂O 1 hora antes de la inducción. α-cetoisobutirato se convierte en isoleucina, y el ácido α-cetoisovalérico se convierte en leucina y valina. Esta metodología ha aumentado drásticamente el rango de peso molecular útil de proteínas y complejos proteicos evaluables por RMN cuando se utilizan técnicas de metil TROSEY.

Application Notes
➤ Stereospecific Leu/Val Methyl Labeling: An Important Technology for NMR Studies of High-Molecular-Weight Complexes
➤ Production of U-[²H], Thy-γ2[¹³CH₃] Labeled Proteins for methyl-TROSY NMR
➤ Isotope Labeling of Alanine Methyl Groups on a Deuterated Background for NMR Studies of High-Molecular-Weight Proteins
➤ Specific Isotopic Labeling of Methyl Groups Has Extended the Molecular Weight Limits for NMR Studies of Protein Structure and Dynamics 

Researcher Perspective
➤ Selective Isotope-Labeling Methods for Protein Structural Studies

Stable Isotopes for Biomolecular NMR

ɑ-Keto Acids view all

Amino Acids view all

Kano, H.; Toyama, Y.; Imai, S.; et al. 2019. Structural mechanism underlying G protein family-specific regulation of G protein-gated inwardly rectifying potassium channel. Nat Commun, 10(1), 2008. PMID: 31043612
Kurauskas, V.; Schanda, P.; Sounier, R. 2017. Methyl-specific isotope labeling strategies for NMR studies of membrane proteins. Methods Mol Biol, 1635, 109-123. PMID: 28755366