Expresión y estándares de proteínas

Los estudios proteómicos cuantitativos (mediante análisis de EM o RMN) pueden beneficiarse enormemente del uso de proteínas intactas purificadas y marcadas como estándares internos. El uso de proteínas intactas etiquetadas y plegadas adecuadamente son estándares internos ideales porque imitarán, lo más cerca posible, las propiedades físicas y químicas de la proteína endógena objetivo en una muestra antes, durante y después de la digestión. En particular, se someterán a un grado similar de escisión proteolítica que la contraparte no marcada, lo que mejorará la precisión del resultado experimental de la espectrometría de masas por dilución de isótopos (IDMS) para metodologías medias hacia abajo o ascendentes.

Además de algunas proteínas marcadas con isótopos estables del catálogo, CIL se complace en ofrecer medios de crecimiento celular marcados para E. coli, insectos, levaduras y células eucariotas. Se pueden sobreexpresar proteínas humanas específicas en una variedad de tipos de células utilizando estos medios junto con técnicas recombinantes de modo que se pueda obtener una cantidad relativamente grande de proteína purificada marcada para estudios proteómicos. También están disponibles reactivos y kits de CellFree Sciences CFS, que se utilizan para producir proteínas marcadas de manera uniforme o selectiva con rendimientos ideales para aplicaciones proteómicas basadas en MS.

Reactivos/kits de proteínas y péptidos marcados con isótopos estables

➤ Stable Isotope Standards for Mass Spectrometry
➤ Insect Cell Media
➤ Mammalian Cell Media
➤ Yeast Media and Reagents
➤ Rich E. coli Media 
➤ CFS Products 

notas de aplicación
➤ Full-Length Expressed Stable Isotope-Labeled Proteins for Quantification
➤ Top Ten Tips for Producing ¹³C, ¹⁵N Protein in Abundance

Medios de crecimiento celular y producción de proteínas ver todo

Expresión de proteínas libres de células ver todo

❛❛Utilizamos CIL porque, además de sus medios etiquetados, cuentan con una amplia línea de reactivos para RMN biomolecular, como tampones, detergentes y agentes reductores. También han sido de gran ayuda al agregar nuevos productos en respuesta a las necesidades de los clientes.❜❜

– Christopher Lepre, PhD
Investigador II, Biología Estructural

❛❛Estamos muy satisfechos con la calidad del medio BioExpress^® 6000 de CIL. Los medios de crecimiento de células de mamíferos de CIL brindan una excelente oportunidad para obtener muestras de proteínas eucariotas marcadas con isótopos para estudios de RMN. Al comparar los medios BioExpress 6000 de CIL con los medios de crecimiento ricos típicos, no se encontraron diferencias en las tasas de crecimiento o expresión.❜❜

– Profesor Dr. Harald Schwalbe
Instituto de Química Organizada

❛❛En nuestras manos, BioExpress^® 1000 de CIL funcionó a las mil maravillas. La tasa de crecimiento celular y el nivel de expresión de proteínas coincidieron esencialmente con los resultados obtenidos con el caldo Luria, y la eficiencia del etiquetado ¹⁵N fue excelente.❜❜

– Tero Pihlajamaa, PhD
Centro Finlandés de RMN Biológica, Instituto de Biotecnología

Preguntas frecuentes

¿Qué es un flujo de trabajo proteómico cuantitativo ascendente? La proteómica ascendente es un flujo de trabajo común basado en EM que se utiliza para identificar y/o cuantificar proteínas en una muestra determinada mediante el análisis de péptidos únicos generados y a partir de la escisión enzimática de sus proteínas.

¿CIL tiene la capacidad de expresar otras proteínas? Será necesario evaluar las estructuras primaria y secundaria. Por favor contacte con Nexomics Biosciences(info@nexomics.com) con detalles completos de la solicitud (por ejemplo, ID de UniProt, tipo de etiquetado, requisitos de caracterización, cantidad). Además, consulte Nexomics Biosciences sitio web para obtener más información sobre sus servicios de producción de proteínas.

Fogeron, M.L.; Lecoq, L.; Cole, L.; et al. 2021. Easy synthesis of complex biomolecular assemblies: Wheat germ cell-free protein expression in structural biology. Front Mol Biosci, 8, 639587. PMID: 33842544
Minikel, E.V.; Kuhn, E.; Cocco, A.R.; et al. 2019. Domain-specific quantification of prion protein in cerebrospinal fluid by targeted mass spectrometry. Mol Cell Proteomics, 18(12), 2388-2400. PMID: 31558565
Lacabanne, D.; Fogeron, M.L.; Wiegand, T.; et al. 2019. Protein sample preparation for solid-state NMR investigations. Prog Nucl Magn Reson Spectrosc, 110, 20-33. PMID: 30803692
Zhong, F.; Xu, M.; Metz, P.; et al. 2018. A quantitative metabolomics study of bacterial metabolites in different domains. Anal Chim Acta, 1037, 237-244. PMID: 30292298
Reddy, P.T.; Brinson, R.G.; Hoopes, J.T.; et al. 2018. Platform development for expression and purification of stable isotope labeled monoclonal antibodies in Esherichia coli. MAbs, 10(7), 992-1002. PMID: 30060704
Zhang, C.; Gao, S.; Molascon, A.J.; et al. 2014. Quantitative proteomics reveals histone modifications in crosstalk with H3 lysine 27 methylation. Mol Cell Proteomics, 13(3), 749-759. PMID: 24382802
Hessling, B.; Buttner, K.; Hecker, M. 2013. Global relative quantification with liquid chromatography-matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight (LC-Maldi-TOF) – cross-validation with LTQ-Orbitrap proves reliability and reveals complementary ionization preferences. Mol Cell Proteomic, 12(10), 2911-2920. PMID: 23788530
Zhang, C.; Liu, Y.; Andrews, P.C. 2013. Quantification of histone modifications using ¹⁵N metabolic labeling. Methods, 61(3), 236-243. PMID: 23454290
Singh, S.; Springer, M.; Steen, J.; et al. 2009. FLEXIQuant: a novel tool for the absolute quantification of proteins, and the simultaneous identification and quantification of potentially modified peptides. J Proteome Res, 8(5), 2201-2210. PMID: 19344176