代谢通量

同位素示踪剂是监测代谢途径活动(即通量)的重要工具。 为了定量培养哺乳动物细胞中中心碳代谢的通量,D-葡萄糖 (13C6, 99%) (CLM-1396) 或 L-谷氨酰胺 ( 13C5, 99%) (CLM-1822) 添加到缺乏这些主要营养素的培养基中。 细胞在标记的培养基中生长,并且。 代谢物标记通过 GC-MS 或 LC-MS 测量。 传统上,葡萄糖被认为是许多细胞类型,尤其是癌细胞的主要碳源。 然而,最近的研究表明,谷氨酰胺通常在三羧酸 (TCA) 循环的供给中发挥主要作用。 谷氨酰胺对 TCA 循环四碳单位的贡献程度可以根据苹果酸和天冬氨酸标记来测量,对二碳单位的贡献程度可以根据乙酰辅酶A和脂肪酸标记来测量。 柠檬酸盐是一种信息量特别丰富的分子,因为它反映了 TCA 循环的二碳和四碳单元。 借助现代仪器,可以并行测量所有这些物种以及其他数十种物种的同位素标记,从而实现系统级通量定量。 这些方法也可以转化为体内环境,即在切除肿瘤或其他组织样本之前给小鼠或患者注入标记的营养物质。 代谢在生物工程和疾病病理生理学中的重要性导致这些方法在生物化学科学中得到广泛应用。

Cellular Metabolism and Metabolomics

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常见问题

什么是13C-MFA? 13C-MFA 或 13C 代谢通量分析是一种稳定同位素辅助技术,是精确测定通量的金标准。 可以利用稳定同位素标记的示踪剂结合质谱 (MS) 或核磁共振 (NMR) 来推断通量。

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示例参考

Antoniewicz, M.R. 2021. A guide to metabolic flux analysis in metabolic engineering: Methods, tools and applications. Metab Eng, 63, 2-12. Read more.