体内蛋白表达

使用基因工程原核或真核细胞对蛋白质进行体内过表达仍然是生产富含同位素的蛋白质的最有效方法，适用于核磁共振分析。在原核表达系统中，大肠杆菌BL21（DE3）菌株的使用是迄今为止最受欢迎和最具成本效益的。对于某些蛋白质，例如膜蛋白，大肠杆菌中的 过表达导致重组蛋白以不溶性形式沉积到包涵体中，然后需要使用去垢剂或脂质重新折叠蛋白质以获得生化活性形式。为了提高在不需要重新折叠的情况下获得正确折叠的蛋白质的可能性，使用了真核表达系统，因为这些细胞类型包含更复杂的分子机制（例如，伴侣）来帮助在表达过程中折叠蛋白质。最流行的真核表达系统采用酵母细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞。在所有细胞类型中都可以进行统一和大多数类型的选择性标记。

无论采用何种方法，尺寸大于~25 kDa的蛋白质或复合物通常需要氘富集，以简化光谱并减少与1H偶极耦合相关的线展宽的有害影响。因此，用于在体内表达此类蛋白质的最小培养基必须使用氧化氘（D2O）配制。对于大蛋白质或复合物的研究，需要均匀氘代葡萄糖作为碳源。

Stable Isotopes for Biomolecular NMR

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❛❛在我们手中，CIL的BioExpress 1000就像一个魅力。细胞生长速率和蛋白表达水平与Luria肉汤获得的结果基本匹配，15N标记效率优异。❜❜

Tero Pihlajamaa, PhD | Institute of Biotechnology, University of Helsinki, Finland

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提琴完成

CIL的Celtone是一种最畅销的全富媒体，用于使用大肠杆菌生产标记的重组蛋白。它可作为粉末提供以增加稳定性（提琴基粉）或液体（提琴完全）以易于使用。大提琴 Complete 是一种即用型培养基，每升培养基含有 10 g Celtone 粉末，无需稀释或调节 pH 值，每批均经过无菌、细胞生长和蛋白质表达测试。

提琴粉

CIL的Celtone粉是一种标签营养丰富的添加剂，可用于最少的培养基。粉末培养基的浓度为每升 1 g 至 10 g，以提高蛋白表达率。Celltone Plus含有两倍以上的营养成分 Celtone 基粉，含有均匀富集的氨基酸和肽，以促进 BL21 细胞的生长。每升培养基使用 10 克 Celtone Plus 可实现真正卓越的性能，然而，产量的提高是显而易见的 浓度低至 1 g/L。

常见问题

我如何知道使用哪种最小的培养基试剂来制造具有特定均匀标记模式的蛋白质？

使用什么藻类菌株来制造BioExpress® 1000？四叶苣苔。

使用什么藻类菌株来制造提琴粉和提琴®®完整培养基？寻常小球藻。

BioExpress和Celtone媒体有什么区别？两种培养基相似，但由于它们来自两种不同的藻类菌株，因此它们略有不同。要知道哪种蛋白质对感兴趣的特定蛋白质更有效，建议先进行一个小的测试实验。

使用什么藻类菌株来制造氨基酸混合物产品？四叶苣苔。

全藻细胞产品是什么藻类菌株？四叶苣苔

参考实例

Otten, R.; Chu, B.; Krewulak, K.D.; et al. 2010. Comprehensive and cost-effective NMR spectroscopy of methyl groups in large proteins. J Am Chem Soc, 132(9), 2952-2960. PMID: 20148553 
Studier, F. W. 2005. Protein production by auto-induction in high-density shaking cultures. Protein Expr Purif, 41(1), 207-234. PMID: 15915565
Tyler, R.C.; Sreenath, H.K.; Singh, S.; et al. 2005. Auto-induction medium for the production of [U-15N]- and [U-13C, U-15N]-labeled proteins for NMR screening and structure determination. Protein Expr Purif, 40(2), 268-278. PMID: 15766868